Na
realização de testes cinéticos para determinação das enzimas, muitas
vezes nos deparamos com algumas dificuldades, no momento de definir
o Fator de Calibração exato de trabalho.
Isto
acontece porque o Fator depende de uma série de variáveis, que devem
ser computadas juntas, para então chegarmos ao seu valor.
Estas variáveis
são:
1-
Volume
de Amostra (VA);
2-
Volume
de Reagente (VR);
3-
Volume
de Diluente (VD), quando utilizado;
4-
Volume
Total (VT), que é igual a VA+VR+VD;
5-
Caminho
óptico do equipamento em centímetros (C)
e
6-
Coeficiente
de Absortividade do Composto Corado/Substrato (@).
Este
último, o @, trata-se em última análise de “ o quanto de um composto
absorve a luz, em um dado comprimento de onda, num caminho óptico
de 1 cm e na concentração de 1mM”.
A
tabela abaixo mostra os @ de vários compostos correspondentes aos
vários reagentes Bio Técnica, com seus respectivos comprimentos de
onda.
Tendo
agora em mãos os @ de todos os compostos dos reagentes Bio Técnica, basta
agora utilizar a fórmula abaixo e obter o Fator para QUALQUER
equipamento.
FATOR
= VT x 1000 / VA x @ x C
Exemplo
1 : Fator da Gama GT no COBAS
Fator
= 210 x 1000 / 10 x 9,5 x 0,6 = 3685
Exemplo
2 : Fator da Gama GT no Bio2000
Fator
= 1100 x 1000 / 100 x 9,5 x 1,0 = 1158
ATENÇÃO: Alguns aparelhos possuem caminhos ópticos diferentes de 1
cm como os COBAS (0,6
cm), o AYRONE ( 0,85 cm) e etc...